ELISA法定量测定人血清、血浆、尿液,细胞培养物上清或其它相关液体中胎盘生长因
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中PlGF水平。用纯化的抗体包被微孔
板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入PlGF抗原、生物素化的抗人PlGF抗体、HRP
标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，
并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的PlGF呈正相关。用酶标仪在450nm
2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，
然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,000pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成1,000
原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/mL，临用前15分钟内配
6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先
计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul
检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶
1．细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。
2．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检
3．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15
4．尿液：请收集清晨第一次尿液（中段尿），或24小时尿液，2000xg离心15分钟后收
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准
品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100ul（取1ul检测溶液A加99ul
检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。
4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100ul，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有
7.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底
物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行
1．每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。
2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
3.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B
工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水
纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2 分钟，根据需
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD 值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上
绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物
的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品
2． 一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
3 ． 请每次测定的同时做标准曲线 ． 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
1 ．试剂盒保存：-2 0 ℃（较长时间不用时）；2 -8 ℃（频繁使用时）。
4 ．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影